大肠杆菌诱导表达壳聚糖酶条件的优化(3)

2024-09-12 22:57 97185 来源：论文网

5）无菌条件下转移至冰预冷的50mL离心管中，4℃ 5000g离心10min； 6）弃上清，加入10mL冰预冷的0.1mol/CaCl2，重悬细胞沉淀； 7）冰浴30min，4℃ 5000g离心1

5）无菌条件下转移至冰预冷的50mL离心管中，4℃ 5000g离心10min；

6）弃上清，加入10mL冰预冷的0.1mol/CaCl2，重悬细胞沉淀；

7）冰浴30min，4℃ 5000g离心10min;

8）弃上清，加入3-5mL并预冷的0.1mol/L CaCl2重悬沉淀；

9）继续冰浴或置于4℃冰箱6-8h。

（2）质粒的转化

1）将15μL质粒加入100μL感受态中，混匀；

2）冰浴30min，42℃热激90s，冰浴1-2min;

3）加入500μL LB液体培养基，37℃振荡培养30min;

4）1000g离心5min，弃上清。留约150μL培养液重悬菌体沉淀，涂布于含100μg/mL卡那霉素的LB固体抗性培养基平板上；

5）37℃培养至单菌落出现，挑出培养，按照质粒提取试剂盒的方法提取质粒，备用。