摘要：本实验以飞蓬草内生真菌(y3,y4,y5',j5,j6,j7,g7,g2)为研究对象，通过液体发酵，乙酸乙酯萃取获得代谢产物，以致病菌金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、白色念珠菌等做为指示菌，采用96孔板法筛选，牛津杯法测定其抑菌效果以及最小抑菌浓度测定（MIC值）。实验结果表明：内生真菌（y3,y5,）发酵产物对金黄色葡萄球菌具有良好的抑菌效果，菌株Y3抑制率最高达到73.09%，菌株Y5,抑制率最高达到43.94%;菌株Y3最小的抑菌浓度为5mg/mL,菌株Y5，最小的抑菌浓度为10mg/mL,飞蓬草内生真菌发酵产物有良好的抑菌活性，在食品防腐剂开发中具有很大的应用潜力。

Abstract  In this experiment, endophytic fungi (Y3, Y4, Y5', J5, J6, J7, G7, G2) of Erigeron praecox were studied. Through liquid fermentation, ethyl acetate was extracted to obtain metabolites. The pathogenic bacteria Staphylococcus aureus, large intestine Escherichia coli, Candida albicans, etc. as indicator bacteria, using 96-well plate method, Oxford cup method to determine its antibacterial effect and minimum inhibitory concentration (MIC value) experimental results show that: endophytic fungi (Y3, Y5 ,) The fermentation product has good antibacterial effect on Staphylococcus aureus, the highest inhibition rate of strain Y3 is 73.09%, strain Y5, the highest inhibition rate is 43.94%; the minimum inhibitory concentration of strain Y3 is 5 mg/ml, strain Y5 The minimum inhibitory concentration was 10 mg/ml. The endophytic fungi fermentation product of Erigeron praecox had good antibacterial activity and had great potential for application in the development of food preservatives.

关键词：飞蓬草； 金黄色葡萄球菌； 抑菌； 最小抑菌浓度；

Keyword：erigeron annuus；staphylococcus aureus；bacteriostatic；MIC

目    录

1 引言 1

1.1药用植物的内生真菌研究现状 1

1.2飞蓬草研究现状 2

1.3内生真菌抑菌实验方法研究现状 2

1.4 主要研究内容 3

2实验材料与方法 3

2.1实验材料 3

2.1.1实验菌株 3

2.1.2 培养基 3

2.2 实验仪器 4

2.3 实验方法 4

2.3.1  发酵产物制备 4

2.3.2  抑菌活性筛选 4

2.3.3对金黄色葡萄球菌抑菌活性研究 5

2.3.4最小抑菌浓度测定（MIC） 6

3结果与分析 7

3.1 抑菌活性筛选结果 7

3.2 对金黄色葡萄球菌抑菌活性研究结果 10

3.3最小抑菌浓度测定结果 11

4 结论 13

5.讨论 13

参考文献 15

致谢 16

1 引言

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是自然界中存在量很大的一种可致病细菌，也是污染食品及加工食品本身很常见的腐败细菌之一。金黄色葡萄球菌普遍散布于自然界中，空气、土壤、水、人和动物的排泄物中都存在，由于它广泛的存在，危害食品的机会较多，尤其在生牛奶、生肉品、冷冻食品、豆制品及豆类这些较适合金黄色葡萄球菌的生长繁殖，金黄色葡萄球菌还会产生肠毒素。在世界范围内，由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒在细菌性食物中毒中均占有较大比例中，目前有多种对金黄色葡萄球菌的检测方法以及发现对其抑制的物质。金黄色葡萄球菌产肠毒素能力较强且含有多种酶类和毒素，并对多种药物耐药。目前抗生素的滥用现象十分普遍，导致细菌耐药性选择加快。由于金黄色葡萄球菌的耐药性选择加快，很多抗生素都起不到治疗效果所以应该严禁滥用抗生素，避免食源性致病菌加快对耐药性的选择[1-6]。

因此，将金黄色葡萄球菌作为抑菌对象来研究一种新型防腐剂，对抑制金黄色葡萄球菌对食品的污染具有紧迫的现实意义。

1.1药用植物的内生真菌研究现状

植物内生真菌(Endophytic fungus)是指在一定的生长阶段或全部生长阶段存在于健康生长植物组织器官内的真菌，其能够产生结构形态较为新颖、功能作用特殊的初级发酵产物和次级发酵产物。内生真菌周期性的生活在植物体内，大多与宿主植物形成了互利互惠的生存关系：一方面，植物为其内生真菌提供矿物质和光合产物；另一个方面，内生真菌产生的发酵产物，或许能够提高宿主植物对于生物胁迫或者非生物胁迫的抵抗能力，不仅如此，这些发酵产物对于宿主植物的生长发育有着重要影响。近年来，植物内生真菌研究才被重视，而药用植物内生真菌的研究则相对更少。但是目前，药用植物内生真菌已经成为对药用植物资源开发以及保护的一个热点，并且因部分药用植物内生真菌具有能够合成与植物本身相同或相近的药用成分的能力，受到广泛关注。研究表明，能产生具有抗氧化性、抑菌活性的内生真菌也在药用植物中被大量分离获得[7-9]。