2实验材料与方法

2.1实验材料

2.1.1实验菌株

实验室分离出飞蓬草内生真菌的八株菌(y3,y4,y5',j5,j6,j7,g7,g2)，飞蓬草采自杭州师范大学校园；金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、大肠埃希氏菌（Escherichia coli）、白色念珠菌（Candida albicans）、恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)、小麦文枯病菌（Rhizoctonia cerealis）以上五种菌株购自微生物菌种保藏中心。

2.1.2 培养基

PDA培养基（马铃薯葡萄糖琼脂培养基）：去皮马铃薯200 g切成小块，加蒸馏水煮沸20 min,待冷却后用8层纱布过滤，滤液加入葡萄糖20 g，琼脂粉20 g，搅拌均匀后再补充蒸馏水至1000 mL，PH自然，121 ℃高压蒸汽灭菌30 min。

PDB培养液（马铃薯葡萄糖培养液）：马铃薯200g；葡萄糖20g；加蒸馏水至1 000 mL；PH中性；121℃高温灭菌不少于30min。

2.2 实验仪器

表1 仪器和设备

序号 仪器名称 型号 出产公司

1 立式压力蒸汽灭菌器 BL-50A 上海博迅实业有限公司

2 隔水式恒温培养箱 TS-100B 上海天呈实验仪器制造有限公司

3 双人净化工作台 SW-CL-2FD

苏州净化设备有限公司

4 迈瑞酶标仪 MR-96T 迈瑞生物医疗电子股份有限公司

5 冷冻离心机 5810R 艾本德中国有限公司

6 恒温摇床培养箱 HNY-100C 冠森生物（上海）有限公司

7 旋转蒸发仪 RE-52A 上海嘉措仪器设备有限公司

2.3 实验方法

2.3.1  发酵产物制备

（1）液体发酵：对八株菌（y3,y4,y5’,j5,j6,j7,g2,g7）进行液体培养，将八株菌分别接种于装有100 mLPDB培养液中，摇床发酵培养一周，设置摇床参数为28℃，140r/min，摇床培养结束后进行离心（8000rpm，10min），获得发酵产物的上清液；

（2）浓缩：对上清液进行萃取，采取液--液分离萃取法，取等体积的乙酸乙酯和上清液置于分液漏斗中，摇匀并静置分层，取乙酸乙酯相进行浓缩，用旋转蒸发仪旋干，在用DMSO(二甲基亚砜)溶解，并配制成3个的溶度梯度(分别为100mg/mL、10mg/mL、1mg/mL),以备用。