1.2飞蓬草研究现状

飞蓬草又叫加拿大蓬、小飞蓬，为菊科一年生或越年生草本植株，其本属植物达到250种，我国有近30种，主要分布在南北各省。飞蓬草常生于山坡、草地或者牧场，性耐寒，喜向阳，在土壤疏松、肥沃、湿润而排水良好的地方生长良好。并且飞蓬草可作为一种药用植物，地上部分与地下部分植株均可以入药，有消炎止血、利尿的作用，并可产生治疗痢疾、肠炎、胆囊炎等功效[10]。飞蓬草可以产生香草酸、丁香酸、柠檬烯等具有抑菌作用的发酵产物，并且有扩张心脑血管、降血脂、改善微循环等的作用[11]。目前已测出飞蓬草植株提取物的化合物为：野草芩苷、、异槲皮素苷、槲皮素、木犀草素等，同时飞蓬草提取物的乙酸乙酯提取物有很强的除草活性潜力[12]。

目前对飞蓬草的研究主要集中在除草活性研究和生物活性研究等方面，停留在研究药用植物植株本身，对于其各个部位的内生真菌的发酵产物的研究还比较少。本次试验通过对飞蓬草内生真菌发酵产物的体外抑制金黄色葡萄球菌实验的研究，探究飞蓬草内生真菌发酵产物的最佳抑菌浓度，为飞蓬草内生真菌发酵产物理化分析研究提供一定的参考。

1.3内生真菌抑菌实验方法研究现状

测定抗菌药物体外抑制细菌生长效力的试验称之为抑菌实验，诸多学者也致力于研究，如刘晓莹，孙文斌等研究从广西地不容块根中分离出的 DBＲ－12 和 DBＲ－23 两株内生真菌的抑菌活性，为其在抗菌剂领域的开发利用提供依据。首先用液体培养基对内生真菌进行发酵培养，采用两相溶剂液液萃取法对发酵产物进行初步分离，然后用菌丝生长速率法和带毒平板法分别测定发酵产物对10种植物病原真菌和15种动物致病菌的抑菌活性[13]。

据罗彬，郭明等研究白花蛇舌草、叶下珠、土牛膝、飞机草和马樱丹不同提取方法的提取物对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌作用，试验采用煎煮法和乙酸乙酯浸泡法对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌进行了药敏片抑菌试验。结果表明: 5 种中药制剂对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有抑菌作用[14]，抑菌实验有许多的实验方法，例如活菌计数法、琼脂稀释法、其他方法[15-21]等。

最小抑菌浓度是指测定抗菌药物抗菌活性大小的一个指标，指在体外培养细菌18-24小时后能抑制培养基内病原菌生长的最低药物浓度，钟美、江丹等人对传统以肉眼观察浑浊程度判断最小抑菌浓度的测试方法进行了改良，探讨了浊度法、红四唑（TTC）显色法和刃天青显色法3种方法对连翘提取液MIC结果判断的影响[22]。Maryam Azizkhani等[23]在研究肉桂精油和罗勒精油对金黄色葡萄球菌的生长及肠毒素产生的影响时发现其抑制SEs产生的最低浓度分别为1%和0.2%。最小抑菌浓度测定也有几种方法，例如以下几种：

测定纳他霉素的最小抑菌浓度采用固体培养基稀释法，将不同浓度的纳他霉素加于融化后冷却至-45摄氏度的定量琼脂培养基中，混合均匀，倾注平板，琼脂凝固后即为含不同浓度纳他霉素的培养基[24]。

采用试管稀释法测定大青叶和板兰根的各级提取物-总浸液、乙醇提取液、正丁醇萃取液对各实验菌的最小抑菌浓度( MIC) 。结果:各级提取物对实验菌分别有不同程度的抑菌作用, 其中对金黄色葡萄球菌的抑菌作用最为明显[25]。

1.4 主要研究内容

以实验室分离获得的飞蓬草内生真菌（y3,y4,y5’,j5,j6,j7,g7,g2）为研究对象，将这八株菌进行液体发酵，获得发酵产物，然后筛选出抑菌活性强的菌株，以致病菌金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、白色念珠菌等做为指示菌，牛津杯法测定其抑菌效果，确定其最小抑菌浓度（MIC测定）。