摘要：目的：探讨多柔比星诱导的卵巢毒性对小鼠卵巢颗粒细胞的影响。方法：通过CCK-8法确定多柔比星在颗粒细胞的IC50；通过DAPI染色法定性定量检测多柔比星对颗粒细胞凋亡的影响；Caspase-3/7荧光探针法定量检测多柔比星对颗粒细胞凋亡的影响。结果：CCK-8法确定多柔比星在颗粒细胞的IC50为3.2 µg/ml；DAPI染色和Caspase-3/7荧光探针检测法均显示多柔比星以剂量依赖性的方式诱导卵巢颗粒细胞凋亡。结论：多柔比星引起的卵巢毒性能诱发卵巢颗粒细胞的凋亡。

关键词：多柔比星；卵巢早衰；小鼠卵巢；颗粒细胞；细胞凋亡

Toxicity test of the chemotherapy drug doxorubicin in mouse ovarian granulosa cells

Abstrcat: Objective:To investigate the effects of doxorubicin-induced ovarian toxicity on granulosa cells of mouse ovaries. Methods: determination of doxorubicin IC50 in granular cells by CCK-8 reagent. The effects of DAPI on the apoptosis of granulocytes were determined by DAPI staining. Caspase-3/7 fluorescence probe method was used to quantitatively detect the effect of dorubicin on apoptosis of granulocytes. Results: the IC50 of doxorubicin in granulocytes was determined by cck-8 assay to be 3.2g /ml. Both DAPI staining and caspase-3/7 fluorescence probe assay showed that doxorubicin induced apoptosis of granular cells in a dose-dependent manner. Conclusion:Ovarian toxicity induced by doxorubicin induces apoptosis of ovarian granulosa cells.

Keyword：Doxorubicin; premature ovarian failure;mouse ovaries;granulosa cells; apoptosis

目录

1.绪论 1

1.1 研究背景及国内外研究现状 1

1.1.1癌症研究及化疗药物多柔比星的应用现状 1

1.1.2化疗药物作用机理及其毒性 1

1.1.3多柔比星诱导肿瘤细胞凋亡的分子作用机制 2

1.1.4多柔比星引起的卵巢毒性及其分子作用机制 2

1.1.5多柔比星导致的卵巢早衰 3

1.2卵巢细胞群及其体外培养 4

1.3 研究目的与研究意义 5

1.3.1 研究目的 5

1.3.2 研究意义 5

1.4本课题研究的主要内容 6

1.5主要的实验原理 6

2.材料与方法 9

2.1 实验动物 9

2.2 试剂 9

2.3主要仪器 10

2.4实验方法 10

2.4.1 小鼠的饲养 10

2.4.2 小鼠卵巢颗粒细胞的培养 10

2.4.3 CCK-8试剂确定多柔比星在颗粒细胞的IC50 11

2.4.4 DAPI荧光染色检测药物对颗粒细胞凋亡作用的影响 11

2.4.5 Caspase-3/7荧光探针检测药物引起的颗粒细胞的凋亡 11

3.结果与分析 13

3.1 结果 13

3.1.1多柔比星在颗粒细胞的IC50 13

3.1.2 DAPI染色检测颗粒细胞凋亡 13

3.1.3 Caspase-3/7荧光探针检测颗粒细胞凋亡 16

3.2 总结与分析 17

4. 结论与展望 19

4.1 结论 19

4.2 展望 19

致谢 20

参考文献 21

1.绪论

1.1 研究背景及国内外研究现状

1.1.1癌症研究及化疗药物多柔比星的应用现状

1.1.2化疗药物作用机理及其毒性

1.1.3多柔比星诱导肿瘤细胞凋亡的分子作用机制

1.1.4多柔比星引起的卵巢毒性及其分子作用机制

1.1.5多柔比星导致的卵巢早衰

1.2卵巢细胞群及其体外培养

卵巢的组成大体包括三类细胞，即各种处于不同发育阶段的卵泡、膜细胞以及颗粒细胞膜；并且卵母细胞与卵巢颗粒细胞之间还存在有缝隙连接[18]。

出生时，卵巢内含有固定的生殖细胞群（卵母细胞）。卵子的产生源于胚胎发育阶段，由减数分裂停滞期的未成熟卵母细胞组成，被几个扁平的体细胞（颗粒）细胞包围。其数量在胚胎发育5个月时达到高峰，随后大部分卵泡发生闭锁，致使卵泡数量也开始减少。出生时卵泡的数量继续减少，至女性进入青春期时卵泡的数仅剩余30万至40万个。卵泡的减少速度是稳定的，但是，当卵泡数量达2.5 万个 (平均约37.5岁) 时，卵泡开始加速减少，当卵泡数量减少到不足1 000时，此时则会发生绝经[14]。