将埃博拉蛋白用CBS5ug/mL稀释，100uL/w加至可拆的酶标板做检测条用，同时包被mTNFRSF19为阳性对照条，室温孵育4h后倒掉包被液，满孔清洗1遍，拍干加入340uL3%的脱脂奶粉进行封闭，室温放置1h。然后弃去封闭液，满孔洗2遍，拍干。加样时，将第二轮淘洗或者二轮以上的库，分别稀释成10x、100x、1000x三个浓度，然后按与之相反的稀释浓度分别加入抗原检测条内，室温下放置1h，弃去样品，洗液清洗3遍后，在原倍噬菌体孔内加入1000x稀释的Flag二抗，其余孔均加入2000x稀释的M13二抗，再次孵育1h后弃去孔内的二抗，满孔清洗3遍，拍干用200uL/w的显色液开始显色，当两个50uL/w显色信号孔在酶标仪上OD630处的值达到2.75左右时，50uL/w加2MH2SO4进行终止，记录OD450处的数值。

2.3EBOV噬菌体淘洗库一次表达

（1）涂布平板：根据库的情况决定稀释倍数，一般做0.5uL与1.0uL两个稀释度，(0.5uL稀释即1mL的2YT加入10uL的库，取50uL涂布在含有用Amp+和Tet+的2YT固体培养基内，1.0uL稀释方法同上)，置于37°培养箱内隔夜培养，次日记录平板上菌数，并存放于4℃冰箱内挑取单克隆用。

（2）一次表达：从4℃拿出平板，在超净台上向96孔深孔板里以200uL/w加入2%ATG培养基，挑单克隆，贴上封口膜，37℃、250r/min过夜振摇；第二天从摇好的菌液里吸取5uL至提前加好100uL/w0.1%ATG的深孔板中，37℃、250r/min培养3h；然后10uL/w加入2YT稀释后的辅助噬菌体，37℃静置0.5h，然后相同温度下200r/min进行1.5h的培养；再向每孔加300uLATK培养基，250r/min过夜振摇；次日取出4000r/min离心10min，取上清做Elisa检测。剩余菌液4℃冰箱内存放10天左右丢弃。

（3）一次表达后的ELISA检测

将埃博拉蛋白用CBS稀释成2ug/mL的浓度，100uL/w进行检测板包被，同时包被spike蛋白作为阳性对照板，室温孵育4h。孵育后弃去包被液，清洗1遍，拍干340uL/w加入2%BSA的封闭液，室温放置1h后，倒掉封闭液，满孔洗2遍，拍干之后在超净台内加样。加样时，在对照板和检测板内先加入90uL的1×PBS，再吸取12uL表达好的菌液上清，最后100uL/w加入3000x稀释的M13二抗，包好室温孵育1h；之后弃去板内液体，满孔清洗3遍，拍干开始显色，在酶标仪上读取630nm处的OD值，在检测板的最后一孔数值达到7.5左右时50uL/w加2M浓硫酸终止显色，读取并记录450nm处的OD值。