一、毕业设计（论文）内容及要求（包括原始数据、技术要求、达到的指标和应做的实验等）

1．提供条件：

液相色谱仪、水浴恒温振荡器、流式细胞仪、荧光倒置显微镜、激光扫描共聚显微镜、高速离心机、酶标仪、电泳仪及镍柱等仪器；

大肠杆菌BL21菌株、目的基因rhaB1-EGFP、质粒pET21a、标记基因GFP、限制性内切酶、TEMED、Tris-HCl缓冲液、蛋白标准分子量、底物发光试剂盒及芦丁等材料。

2．设计内容与要求:

（1）鼠李糖苷酶RhaB1和荧光蛋白融合载体的构建及表达；

（2）考察并优化诱导表达产酶RhaB1的工艺条件参数；

（3）酶RhaB1的纯化、表征及其酶学性质等研究；

（4）酶RhaB1催化转化芦丁制备异槲皮苷的工艺。

要求:

①以严谨的态度对待实验步骤，真实、及时、准确、详实记录实验的原始数据。

②及时对实验数据分析处理，按计划规定完成相应实验内容。

二、完成后应交的作业（包括各种说明书、图纸等）

1. 毕业设计（论文）一份（不少于1.5万字）；

2. 外文译文一篇（不少于5000英文单词，附英文原文）；

3. 开题报告。

注：以上作业应同时上交电子文档。

三、完成日期及进度

2017年2月22日至2017年6月10日，共16周。

进度安排：

1.  2.20～3.3，做好指导学生撰写毕业设计（论文）前期工作，做好任务书下达。

2.  3.4～3.17，指导学生撰写完成毕业设计（论文）开题报告工作，完成进入毕业设计（论文）工作学生资格审查工作。

3.  3.18～5.26，开展中期检查，完成毕业设计（论文）初稿、定稿的指导、撰写及审核。

4.  5.27～6.9，完成毕业设计（论文）的学生答辩、成绩评定和提交、评优推荐工作。

四、主要参考资料（包括书刊名称、出版年月等）:

[1] Yadav V, Yadav P K, Yadav S, et al. α-L-Rhamnosidase: a review [J]. Process Biochemistry, 2010, 45(8): 1226-1235.

[2] Wahlfors J, Loimas S, Pasanen T, et al. Green fluorescent protein (GFP) fusion constructs in gene therapy research [J]. Histochemistry and Cell Biology, 2001, 115(1): 59-65.

[3] 赵晓蓉, 曹利民, 彭吉林,等. 稳定表达EGFR-GFP融合蛋白细胞系的建立 [J]. 湖北医药学院学报, 2006, 25(3): 129-132.

[4] 关新刚, 苏维恒, 于欣, 等. Tat-GFP融合蛋白的表达纯化及其穿膜活性 [J]. 吉林大学学报(医学版), 2014, 40(4): 725-728.

[5] O'Neill E C, Stevenson C E M, Paterson M J, et al. Crystal structure of a novel two domain GH78 family α‐rhamnosidase from Klebsiella oxytoca with rhamnose bound [J]. Proteins: Structure, Function, and Bioinformatics, 2015, 83(9): 1742-1749.

[6] Cui Z, Maruyama Y, Mikami B, et al. Crystal structure of glycoside hydrolase family 78 α-L-rhamnosidase from Bacillus sp. GL1 [J]. Journal of Molecular Biology, 2007, 374(2): 384-398.

[7] Drew D, Newstead S, Sonoda Y, et al. GFP-based optimization scheme for the overexpression and purification of eukaryotic membrane proteins in Saccharomyces cerevisiae [J]. Nature Protocols, 2008, 3(5): 784-798.

[8] Zhu D, Gong A, Xu Y, et al. Isoquercitrin production from rutin catalyzed by naringinase under ultrasound irradiation [J]. Journal of Molecular Catalysis B Enzymatic, 2016, 134: 186–195.

[9] Drew D, Lerch M, Kunji E, et al. Optimization of membrane protein overexpression and purification using GFP fusions[J]. Nature Methods, 2006, 3(4): 303-313.

[10] Spohner S C, Zahn D, Schaum V, et al. Recombinant α-L-rhamnosidase from Aspergillus terreus in selective trimming of α-L-rhamnose from steviol glycosides[J]. Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic, 2015, 122: 248-254.

[11] Gerstorferová D, Fliedrová B, Halada P, et al. Recombinant α-L-rhamnosidase from Aspergillus terreus in selective trimming of rutin[J]. Process Biochemistry, 2012, 47(5): 828-835.