然而对于外源亚精胺及合成抑制剂浸种对小麦种子萌发过程中游离态多胺含量的影响的研究还比较少,因此本研究采用外源亚精胺(Spd)及合成抑制剂浸种
然而对于外源亚精胺及合成抑制剂浸种对小麦种子萌发过程中游离态多胺含量的影响的研究还比较少,因此本研究采用外源亚精胺(Spd)及合成抑制剂浸种,研究小麦种子萌发过程中种子的萌发特性以及游离态多胺含量变化。并通过相关分析,找出游离态多胺含量变化与种子萌发的相关性,探索亚精胺及合成抑制剂浸种对小麦种子萌发的作用,为小麦作物的农业生产提供理论依据。
1. 材料与方法
1.1 实验所需主要仪器设备和试剂
实验所需主要仪器设备:培养皿、恒温水浴锅、普通离心机、分光光度计、高效液相色谱仪、高速冷冻离心机等。
实验所需主要试剂:HgCl2、亚精胺(Spd)、合成抑制剂甲基乙二醛双脒基腙(MGBG)、醋酸钠、CaCl2、I2、盐酸、苯甲酰氯(分析纯)、NaOH、可溶性淀粉、KI、NaCl、乙醚(分析纯)、蒸馏水、HClO4、色谱甲醇、去离子水、多胺标准品(Put、Spd、Spm,由sigma公司生产)。
1.2 材料培养与处理
实验材料:小麦(周麦22)种子,由周口市农科所提供。
种子消毒:将小麦种子用蒸馏水冲洗,干净后,将其浸泡在 0.1%氯化汞溶液中5分钟,然后用蒸馏水进行冲洗,一般冲2~3次可洗净。即完成消毒环节。
浸种处理:浸种时分三个组,使用一定量的蒸馏水浸种的对照组,使用一定量的浓度为1.0mmol/L Spd溶液浸种,以及用一定量0.5mmol/L的合成抑制剂(MGBG)浸种的两个实验组。每组取500粒左右消毒过的小麦种子,置于直径20cm的大型培养皿中,在20℃环境下浸种,时间为20个小时。
萌发培养:浸种处理完成后,即可开始培养小麦种子。挑选颗粒均匀,而且饱满、没有病虫害的浸种后的种子分别均匀播种在铺有三层滤纸的培养皿(直径20cm)中,每皿播种150粒种子,每个处理做四个重复。具体处理如下:
对照组(CK):蒸馏水浸种的小麦种子,用蒸馏水培养,浸没种子2/3即可。
亚精胺处理组(Spd组):亚精胺浸种的小麦种子,用1.0mmol/L的Spd溶液进行培养,浸没小麦种子2/3即可。
合成抑制剂处理组(MGBG组):合成抑制剂浸种的小麦种子,用浓度0.5mmol/L的合成抑制剂溶液培养,浸没种子2/3即可。
取样与指标测定:分别于完成浸种萌发之后的第0d、2d、4d、6d,取小麦种子测a-淀粉酶活力、种子内游离态多胺含量。在浸种后的第3d,测种子的发芽势;在浸种后的第7d,测种子的发芽率。