加州野大麦作为小麦的野生近缘物种，具有很多的优良性状，包括抗大麦黄矮病，抗冻害，耐低氮等很多能够适应自然环境的性状。多年来，本实验室通过对普通小麦中国春-加州野大麦双二倍体的白粉病抗性鉴定，结果发现此双二倍体对小麦白粉病表现出一定的抗性。袁静娅（2011）通过对一套所选育的小麦-加州野大麦二体异染色体系的苗期以及成株期的白粉病抗性鉴定，发现二体异附加系 DA6H（DAH4）的苗期中感，成株期为高抗，从而推测加州野大麦的6H染色体可能携带白粉病的抗性基因。方宇辉（2012）进一步对所选育到的异染色体系进行白粉病抗性的鉴定，结果发现，加州野大麦的 2Hc 和 6Hc 上可能携带有抗白粉病的抗性基因。

为了进一步明确加州野大麦的6H染色体是否对小麦白粉病具有抗性，本研究首先将已有的小麦-加州野大麦6H二体异附加系与高感白粉病的小麦06Y86进行杂交，获得杂种，杂种经过自交过程之后，获得F2的群体。在F2群体中，结合着6H染色体特异分子标记的分析，GISH-FISH分析和田间白粉病的抗性分析，明确加州野大麦的6H染色体白粉病抗性；同时，利用分子标记和原位杂交技术筛选涉及6H染色体的端体系，结合田间白粉病的抗性鉴定，最终在6H特定的染色体臂上定位加州野大麦的白粉病抗性位点。同时，研究结果将为小麦的遗传改良过程提供重要的种质以及抗性资源。

1  材料与方法

1．1  材料

本实验所涉及的实验材料有普通小麦品种中国春（T. aestivum L. c.v. Chinese spring，CS）、普通小麦品种南农06Y86都由南京农业大学细胞遗传所提供；实验材料中国春-加州野大麦双二倍体引自 Wheat Genetics and Genomics Resources Center , Kansas State University，USA；

其中，本实验过程中用到的杂交后代群体有：①普通小麦中国春与普通小麦中国春-加州野大麦双二倍体回交、自交得到的BC1F3 代，在BC1F3中筛选出来的6H二体异附加系群体；②普通小麦-加州野大麦6H二体异附加系与高感白粉病的小麦06Y86的杂交群体通过自交之后的F2代群体。

1．2  方法

1．2．1  植物根尖体细胞有丝分裂中期染色体制片  

(1) 滴片法（适用于制作比较精细的染色体片子，结果较好）

步骤如下：

① 把根尖从盛有70%酒精的离心管中取出，使用ddH2O冲洗，时间为5min/次，一共两次。冲洗结束之后使用纸巾将残留的多余水分吸去。使用刀片将根尖的根冠切除，保留分生组织区，同时将1-2个根尖的分生组织区放入0.5mL的离心管中，离心管中要提前放入酶液，用量为20ul。

② 将离心管放入37℃的水浴中，进行50-60 min的酶解。

③ 然后向离心管中加入400ul的 1×TE，时间控制在5min终止反应。

④ 吸干离心管中的TE之后，然后向离心管中加入70%的酒精400ul，冲洗5min/次，一共两次。冲洗结束后，要将离心管里的酒精吸干净。

⑤ 将35ul的醋酸：甲醇(9:1)悬浮液加入离心管。然后用解剖针捣碎、混匀根尖的分生区部分，同时悬浮根尖的细胞。

⑥ 准备湿润的盒子，放入干净的载玻片，湿度可以根据具体环境进行适当的调整。用手指弹动悬浊液，动作要轻。每张载玻片的悬浮液用量为3-4ul。结束时候把盒子盖上，等待载玻片完全干燥的时候，将载玻片拿出。镜检，选择较好的片子，要求染色体形态较好、染色体数完整、分散相优质。

⑦ 紫外交联：把片子 选取好，放入紫外交联仪中，时间控制为3min，强度控制为0.125J/cm2。

(2) 压片法

根尖细胞的染色体制片的压片法：参照 Gill （1991））等的方法，但稍作改动。

步骤如下：