① 将种子放置在培养皿中（要提前垫好湿润滤纸），放在 23 ℃温箱，直到种子发芽。

②大约 23 h种子露白后，从温箱中拿出，将培养皿中多余水分倒掉，移至 4 ℃冰箱处理，时间约为16～24 h。

③然后将发芽的种子移至培养箱（23 ℃）中继续进行培养。

④等到根长为 1～2 cm 时，将培养箱温度升到28 ℃处理1-2小时。

⑤将剪取好的2条根尖放在指形管（里面盛有冰水），然后连同指形管一起在0 ℃冰水中，进行处理，时间为22～24 h。

⑥用滤纸吸去冷处理过的根尖中的多余水份，同时使用卡诺氏固定液（100% 乙醇：冰醋酸=3:1），进行材料的固定。

⑦ 把固定好的材料放在室温下3天以上（或在 4 ℃冰箱中），保存备用（如果预期要进行长时间保存，则应该选择-20 ℃冰箱）。

⑧ 制片时，将根尖从70%的酒精中取出，放入45%醋酸（或 1% 醋酸洋红）中进行解离，时间控制在10min以上。

⑨ 将根冠切除，同时，切取根尖的分生区的组织（少部分），将切除的分生区组织置于干净载玻片上。

⑩ 加45%的醋酸一滴，同时盖上干净盖玻片（18mm×18mm），轻轻敲打盖玻片，让细胞能够完全分散。

○11使用酒精灯烘烤载玻片，动作要轻而缓慢。等待雾气散开，在桌子上垫一层干燥的滤纸，放入片子，并且轻轻按压载玻片，使得染色体完全分散。

○12将片子放置在相差显微镜下，目的是进行预检测。选取染色体形态较好的、数目完整的、分散相较好的制片，放入-70℃超低温度的冰箱中进行冷冻，过夜。

○13从冰箱中拿出冷冻超过30min的片子，使用双面刀片，揭去盖玻片，动作要轻缓且迅速。揭去盖玻片之后的片子，要在70%、95%、100% 无水乙醇中各自脱水，时间为5min。

○14气干后，把片子放好，准备进行后续的基因组原位杂交的实验步骤。

○15同时将减去根尖的幼苗放置好待用（移植大田之后，用于下一步实验研究）。

1．2．2  小麦叶片的基因组DNA提取

方法采用为CTAB法(王关林等，2002)：提取小麦叶片基因组的DNA。

步骤如下：

① 在田间选取适量的小麦叶片，并装入离心管（2.0 ml），同时在离心管中加入玻璃珠，盖好离心管的盖子。

② 用液氮将离心管预冷（操作过程中需要注意速度，防止离心管炸裂）；使用球磨仪，研磨装好的叶片，使其呈粉末状。

③ 加入约为500ul的CTAB提取液（保证加入的量和样品的体积是相等的），充分振荡、混匀，置于65℃水浴锅中，振荡（400-500rpm），水浴的时间为1h左右。

④ 将离心管从水浴锅中取出，冷却，等待恢复室温；同时加入大约为提取液的一倍体积的24:1（氯仿/异戊醇）混合液，混合均匀，然后放在摇床上（600rpm左右），振荡时间为1h。