再另选取若干粒荷花种子用蒸馏水在25℃-28℃培养箱中培养5-7天,直到荷花幼苗根长达到10-15cm时取出。选取长度基本相同的8组荷花幼苗分别放置在对照组
再另选取若干粒荷花种子用蒸馏水在25℃-28℃培养箱中培养5-7天,直到荷花幼苗根长达到10-15cm时取出。选取长度基本相同的8组荷花幼苗分别放置在对照组(CK)蒸馏水中,单独Cd溶液处理,含有Cd溶液处理的20.22g/L的ACC溶液、100mM葡萄糖溶液、100mM葡萄糖溶液和20.22g/L ACC溶液、100mM甘露醇溶液、100mM甘露醇溶液和20.22g/L ACC溶液、3mL的乙烯抑制剂STS溶液这8种不同处理的试验组中,放置在光照时长10h,温度28℃;避光时长14h,温度25℃的变温培养箱中培养48小时,取出,进行系列生理活性形态测定。
1.2.2 幼苗形态观测
将已在变温培养箱中培养48小时的荷花幼苗平放在白纸上,用尺逐一测量长度(单位:cm),记录数据。
1.2.3 相对电导率(EL)和丙二醛(MDA)含量的测定
电导率是表示物质传输电流能力强弱的一种测量值,它可以反映出荷花幼苗受Cd胁迫伤害导致的细胞膜渗透压的变化。测定根据Blum and Ebercon[14]法。
MDA是膜脂过氧化作用的最终分解产物,其含量可以反映荷花幼苗遭受Cd胁迫伤害的程度。测定根据李合生[15]法。
1.2.4 抗氧化酶活性测定
前期准备具体操作:取1.2.1中所描述的备用样品,在含有液氮的研钵中分
三次加入1.6ml (0.6 ml、0.5 ml、0.5 ml)50mmol/L预冷的磷酸缓冲液(pH7.8),转入离心管中在4℃、12000g下离心20min,上清液即为抗氧化酶粗提液。
超氧化物歧化酶(SOD)测定根据NBT法[16]。
愈创木酚过氧化物酶(POD)测定参考根据Rathemll和Sequeria等愈创木粉法[17]。
过氧化氢酶(CAT)测定参考根据Abei方法[18]。
抗坏血酸过氧化酶(APX)和谷胱甘肽还原酶(GR)测定参考根据Ma和Cheng等方法[19]。
1.2.5 抗氧化剂含量的测定
前期准备操作:取1.2.1中所描述备用样品,将样品用2 ml 5%TCA充分研磨,在15000×g离心10 min,取上清液定容至2mL。AsA与GSH测定方法参考图书《植物生理学实验指导》(第二版)[20]。
1.2.6 统计分析
实验中所得数据均由Excel2007软件进行计算制图,SPSS软件进行差异性分析。每个处理数据重复测定三次,取平均值并求出标准误差,通过单因素方差检验(p<0.05)分析差异显著性。