白鹤芋离体培养和快速繁殖条件研究 (2)

1 材料与方法 1.1 试验材料 1.1.1 植物材料 试验在南京农业大学园艺学院组织培养实验室进行。取小株型白鹤芋品种‘SPS’盆栽苗侧芽建立无菌系,待无


1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 植物材料

试验在南京农业大学园艺学院组织培养实验室进行。取小株型白鹤芋品种‘SPS’盆栽苗侧芽建立无菌系,待无菌苗经过几代培养恢复长势后,选取生长健壮、长势一致、健康无污染的无菌苗,切除根、侧芽及长势较弱的叶片后,作为各处理的试验材料。

1.1.2 培养基

MS + 6-BA 3.0 mg/L + NAA 0.1 mg/L + 蔗糖30 g/L+琼脂7.0 g/L为试验材料基本增殖培养基,在此基础上,更换不同的基本培养基、不同浓度的6-BA、不同浓度的KT,不同浓度的NAA及不同的有机添加物,pH5.6~5.8,按常规方法配制,每瓶分装培养基约为50ml。

1.2 试验方法

1.2.1 白鹤芋的增殖

将所有白鹤芋无菌苗切除根、侧芽及长势较弱的叶片后,接种在基本增殖培养基上,培养基配方为:MS + 6-BA 3.0mg/L + NAA 0.1 mg/L + 蔗糖30 g/L+ 琼脂7.0 g/L,pH5.7,每次生长一个月,再转接,转接3次。每次接种时切除根、侧芽及长势较弱的叶片,使所有白鹤芋无菌苗大小和长势一致,达到控制变量的效果,培养条件:南京农业大学园艺学院组织培养实验室,温度(25±2)℃,光照时间12h/d,光照强度2000lx。白鹤芋无菌苗只对本次试验的基本培养基、植物生长调节剂以及有机添加物处理反应。

1.2.2 不同条件对白鹤芋增殖的影响

(1)不同基本培养基对白鹤芋增殖的影响

选取长势一致、健壮无污染的白鹤芋离体无菌苗,切除根、侧芽及老叶后分别转接至不同种类的基本培养基的增殖培养基中,设置基本培养基为:MS、1/2MS、B5、N6,共4个处理,分别编号M1,M2,M3和M4。添加6-BA 3.0 mg/L、NAA 0.1 mg/L、蔗糖30 g/L、琼脂7 g/L,其中pH5.7,每种基本培养基处理均配制10份培养基,每份培养基上接种4株白鹤芋无菌苗,放入组织培养实验室生长。

(2)不同浓度6-BA对白鹤芋增殖的影响

选取长势一致、健壮无污染的白鹤芋离体无菌苗,切除根、侧芽及老叶后分别转接至不同浓度6-BA的增殖培养基中,设置单一生长调节剂6-BA浓度分别为1.0、2.0、3.0、4.0 mg/L,共4个处理,分别编号A1,A2,A3,A4,基本培养基成分为MS,添加NAA 0.1 mg/L 、蔗糖30 g/L、琼脂7.0 g/L,其中pH5.7,每种6-BA浓度处理均配制10份培养基,每份培养基上接种4株白鹤芋无菌苗,放入组织培养实验室生长。

(3)不同浓度KT对白鹤芋增殖的影响

选取长势一致、健壮无污染的白鹤芋离体无菌苗,切除根、侧芽及老叶后分别转接至不同浓度KT的增殖培养基中,设置KT浓度分别为 0.05、0.10、0.15和0.20 mg/L,共4个处理,分别编号K1,K2,K3,K4。基本培养基成分为MS,添加NAA 0.1 mg/L、蔗糖30 g/L、琼脂7.0 g/L,其中pH5.7,每种KT浓度处理均配制10份培养基,每份培养基上接种4株白鹤芋无菌苗,放入组织培养实验室生长。

(4)不同浓度NAA对白鹤芋增殖的影响

选取长势一致、健壮无污染的白鹤芋离体无菌苗,切除根、侧芽及老叶后分别转接至不同浓度NAA的增殖培养基中,设置NAA浓度分别为 0.1、0.2、0.3和0.4 mg/L,共4个处理,分别编号N1,N2,N3,N4。基本培养基成分为MS,添加6-BA 3.0 mg/L 、蔗糖30 g/L、琼脂7.0 g/L,其中pH5.7,每种NAA浓度处理均配制10份培养基,每份培养基上接种4株白鹤芋无菌苗,放入组织培养实验室生长。

(5)不同有机添加物对白鹤芋增殖的影响

选取长势一致、健壮无污染的白鹤芋离体无菌苗,切除根、侧芽及老叶后分别转接至不同种类的有机添加物的增殖培养基中,设置有机添加物为:蔗糖30 g/L、椰汁50 g/L、椰汁100 g/L、香蕉泥100 g/L,共4个处理,分别编号Y1,Y2,Y3,Y4。基本培养基成分为MS,添加6-BA 3.0 mg/L、NAA 0.1 mg/L、琼脂7 g/L,其中pH5.7,每种有机添加物处理均配制10份培养基,每份培养基上接种4株白鹤芋无菌苗,放入组织培养实验室生长。