偶联限制性内切酶酶切-随机扩增（Coupled Restriction Enzyme Digestion-Random Amplification，CRED-RA）技术是在RAPD技术的基础上用来检测DNA甲基化的一种有效方法。同其他方法相比较，操作简便，容易掌握，实验周期短，成本低，无需使用同位素，对具备基因放大仪的实验室均可以开展工作。国内近年来虽研究了汞、铜、铅等具有明显毒性的重金属元素对涡虫的生理影响[10-12]，但像镧等稀土元素对涡虫的生理影响尚未见报道，尤其是稀土元素对涡虫再生的分子层面的研究还是空白，本实验结合La3+对涡虫生长实验统计以及CRED技术分析La3+对涡虫甲基化程度的影响，为其分子机制提供参考。

1.材料与方法

1.1材料

1.1.1实验对象

所用涡虫采集自北京市植物园樱桃沟。

1.1.2实验试剂

LaCl3（10mM）母液；DNA提取试剂盒（康为世纪生物公司）；HPAII、MSPI内切酶(Takara)。

1.1.3实验器材

PCR仪；恒温培养箱；低温高速离心机；振荡器；恒温水浴锅；全自动数码凝胶成像系统；琼脂糖凝胶电泳仪等。

1.2方法

1.2.1淡水涡虫再生实验

设置对照组（蒸馏水培养），并配置0.1mM、0.5mM、1.0mM、1.5mM四种浓度梯度的LaCl3溶液。取5个培养皿，在清洗擦拭干净后，分别加入20ml处理液，同时每组选取10只健康涡虫虫体，于恒温培养箱中20℃避光培养，连续观察3天。

1.2.2生长统计

在培养期间，定期用解剖显微镜观察各组涡虫的生长情况，测定并记录ck、0.1mM、0.5mM、1.0mM、1.5mM组的再生速度（以再生出眼点和解体的时间为结点），建立统计表格并分析。