2）大肠杆菌扩增[12]

LB培养基配置完成后取大肠杆菌菌液，在每个LB培养基锥形瓶内用移液枪加入180微升大肠杆菌菌液。并用牛皮纸和橡皮筋封住瓶口。整个操作过程都必须在无菌环境下进行。将加入大肠杆菌菌液的LB培养基放入恒温震荡培养箱内恒温震荡培养24H。24H后取出放入冰箱备用。

配置NGM线虫生长培养基（Nematode Growth Medium）

 取容量为1L的锥形瓶，用电子天平称取琼脂粉17g，蛋白胨2.5g，氯化钠3g加入锥形瓶。取1M的K2HPO4·3H2O 22.8g加100ml蒸馏水和KH2PO4 6.8g加50ml蒸馏水混合溶解。调PH至6.0，取25ml加入锥形瓶。加入1L蒸馏水。用牛皮纸和橡皮筋封住锥形瓶口，放入高压蒸汽灭菌锅，调至121摄氏度，0.105MPa灭菌20分钟。

 取MgSO4·7H2O 1.232g加入5ml无菌水，配置成1M的MgSO4。取CaCl2 0.554g加入5ml的无菌水，配置成1M的CaCl2。取0.025g胆固醇加入5ml无水乙醇，配置成5mg/ml的胆固醇乙醇溶液。用0.22μm的一次性无菌滤膜和5ml无菌注射器将以上溶液抽滤灭菌至100ml灭菌蓝盖瓶中。放置在4摄氏度的冰箱中。

 待NGM培养基灭菌完成后冷却至50摄氏度左右时，加入经过抽滤灭菌的1M MgSO4 1ml，1M CaCl2 1ml，5mg/ml胆固醇乙醇溶液1ml作为营养液。

 取足够量培养皿，将NGM培养基均匀倒入培养皿中，待冷却凝固后用移液枪取大肠杆菌菌液180μm均匀滴加在培养基上作为秀丽隐杆线虫的食物，摇匀，放室温下备用。整个操作在无菌环境下进行。

秀丽隐杆线虫传代

  准备好NGM培养基室温放置24h。取已经培养好线虫的培养皿，准备一把铁勺，将培养皿中的含有线虫的培养基平均切分成六块，将表面朝下紧贴覆盖在新NGM培养基表面。合上培养皿盖。放置在恒温培养箱中培养36小时。

秀丽隐杆线虫同步化

  实验需要的是同为L4时期的秀丽隐杆线虫，所以要进行同步化操作。首先往每个培养皿中用移液枪加入2ml无菌蒸馏水，摇匀后倒入15ml离心管，使培养皿中的线虫和虫卵收集在一起。用移液枪取虫液分别分装在1.5ml离心管内。每管约350μl。

  配置碱裂解液。取5mlNaCLO（有效成分≥6%），0.6gNaOH，加入25ml无菌蒸馏水。分别将1ml裂解液加入上述1.5ml离心管，摇晃至虫液澄清。时间需要控制在10min以内以免裂解液将虫卵杀死。将离心管放入离心机内。设定4000r/min，20摄氏度离心3min。离心结束后去除上清液，再加入1ml无菌水后继续离心。重复三次后去上清液。用移液枪吹打离心管底部虫卵，然后用移液枪将虫卵收集与15ml离心管内。准备新的NGM培养基，将虫卵加入培养基，每个培养基加入200μl虫卵液，放入恒温培养箱培养36h后获得L4线虫