摘  要：本实验通过分光光度计、竞争ELISA和中和实验，检测了小鼠巨噬细胞集落刺激因子(mCSF1)单克隆抗体的生物活性。结果显示mCSF1单克隆抗体具有较高的纯度，通过竞争ELISA检测显示该抗体可以阻断mCSF1受体与mCSF1的结合，也说明mCSF1单克隆抗体与mCSF1具有结合作用，并且mCSF1单克隆抗体在M-NFS60细胞上对mCSF1具有结合作用。实验结果表明小鼠巨噬细胞集落刺激因子 (mCSF1)单克隆抗体可结合mCSF1且具有生物活性。

关键词：单克隆抗体; M-NFS60细胞株; mCSF1; 竞争ELISA ; 中和作用

Biological Activities Research of Mouse Macrophage Colony Stimulating Factor Monoclonal Antibody

Abstract：The biological activity of  mouse macrophage colony stimulating factor (mCSF1) monoclonal antibody were detected by the methods of spectrophotometer、competitive ELISA and neutralize experiment. The results showed that mCSF1 monoclonal antibody has high purity, competitive ELISA showed that the antibody can block the combination of mCSF1 receptor and mCSF1, and mCSF1 monoclonal antibody and mCSF1 have binding effect, it also showed that mCSF1 monoclonal antibody can combine with mCSF1 in the M - NFS60 cell. The results suggest that the monoclonal antibody of mouse macrophage colony stimulating factor (mCSF1) can be combined with mCSF1 and has biological activity.

Key words: Monoclonal antibody; M-NFS60 cell line; Mouse macrophage colony stimulating factor; Competitive ELISA; Neutralization

目    录

摘  要： 1

关键词： 1

引言 1

1.实验材料及试剂 3

1.1实验材料 3

1.2实验仪器 3

1.3实验试剂 3

2.实验方法 4

2.1 M-NFS60细胞培养 4

2.2抗体UV检测 5

2.3竞争ELISA 5

2.4中和实验 6

3.实验结果分析 7

3.1抗体UV检测结果 7

3.2竞争ELISA结果 8

3.3中和实验结果 9

4.讨论与结论 11

参考文献 12

致谢 15

小鼠巨噬细胞集落刺激因子(mCSF1)单克隆抗体的生物活性研究

引言

小鼠巨噬细胞集落刺激因子，具有特异性的细胞因子 (Mouse macrophage colony stimulating factor1，mCSF1)。巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)也常常被称作集落刺激因子1(CSF1)，CSF1在骨骼的新陈代谢中当中发挥重要作用，是拥有谱系特异性的一种细胞生长因子[1-2]。

CSF1能在间质细胞中合成，也可以在激活的巨噬细胞、肿瘤细胞、B细胞、T细胞中产生[3]。CSF是一种稳定的二聚体糖蛋白，对单核细胞的增殖、分化、维持细胞活性都具有相当重要的作用[4]。在单核细胞的增殖、分化乃至存活中，CSF1是单核细胞必要的生长因子。除造血组织外，在胚胎滋养层等组织，都能检测到CSF1的受体，这足以说明，CSF1在生物体中，具有广泛活性[5]。

人的破骨细胞可以由CSF1刺激生成，CSF1刺激它分化、存活，而且还可以抑制该细胞的凋亡，根据这个特性，可以用CSF1对骨骼石化症进行治疗。在研究CSF1对破骨细胞的影响时，通过破骨细胞内信号转导途径的研究中发现，当微生物遇到感染时，分泌CSF1的迅速增加，尤其在机体急性感染时，分泌CSF1的速度可提高一千倍[6]。

在对骨豁硬化(op/op)基因突变小鼠的研究中发现，对于缺少CSF1的小鼠来说，会患有破骨细胞缺陷的骨硬化，通过关节置换手术，对于CSF1缺陷的小鼠来说，其关节滑液中存在高浓度的CSF1，而且巨噬细胞和单核吞噬细胞表面存在CSF1受体，就会产生破骨细胞[7]。

Lee[8]等通过一系列实验表明，在正常小鼠中，体内存在CSF1，颅骨细胞和骨髓细胞放在一起培养之后，可以生成破骨细胞，但是在CSF1缺陷的小鼠中，要想生成一定数量的破骨细胞，需要在培养基中额外加入CSF1。

一系列骨豁硬化(op/op)基因突变小鼠的实验，确定了CSF1在OC（破骨细胞）分化中起着至关重要的作用。op/op基因突变的小鼠可以作为一种模型，代表的是小鼠骨豁硬化症，该疾病是因为该机体骨吸收的作用减弱而造成的[9]。各研究小组都通过研究发现，在op/op基因突变的小鼠中，都是因为突变型CSF1的表达量降低，从而引起破骨细胞缺陷[10-11]。