摘  要：采用乙醇—硫酸铵双水相体系进行分离纯化七叶一枝花总黄酮。利用单因素实验和Box-Behnken Design实验设计，探究乙醇质量分数、硫酸铵质量分数、pH、NaCl四个变量对七叶一枝花中总黄酮萃取的影响程度。通过响应面分析法得到七叶一枝花总黄酮分离纯化的最优工艺参数，即：乙醇质量分数26.31 %、硫酸铵质量分数21.71 %、pH5.01、NaC质量分数3.03%。经验证七叶一枝花总黄酮实际萃取率为83.70%，与预测值81.6%的相对误差仅为2.57%。说明该萃取方法得率较高，能够为七叶一枝花中总黄酮的分离萃取提供一定的借鉴意义。

关键词：七叶一枝花；总黄酮；双水相萃取；响应面法；

Research on Extraction Process of Total Flavonoids from Paris Polyphylla

Abstract：Total flavonoids were separated and purified by ethanol - ammonium sulfate aqueous two-phase systems from Paris polyphylla. Mass fraction of crude extract，pH and mass fraction of NaCl on the extraction efficiency of total flavonoids were explored by one-factor-at-a-time and Box-Benhnken design methods. The results showed that the optimal conditions were as follows ：crude extract concentration 26.31% ，pH5.01 ，NaCl concentration 3.03%. Under the above conditions the confirmed tests indicated that the extraction rate of total flavonoids was  83.70%, which had close relation with the predicted yield of the extraction rate of total flavonoids was 81.6%. The study would provide reference for the effective utilization of flavonoids from Paris polyphylla leaves.

Key words：Paris polyphylla；Flavonoids；Aqueous two-phase system；

Response surface methodology

目    录

摘  要 1

引言 1

1材料与方法 2

1.1实验材料与仪器 2

1.2实验方法 3

1.2.1 七叶一枝花总黄酮粗提液的制备 3

1.2.2 七叶一枝花中总黄酮含量测定 3

1.2.3 乙醇-硫酸铵双水相萃取方法 3

1.2.4 乙醇-硫酸铵双水相体系的最佳配比 4

1.2.5探究影响七叶一枝花总黄酮萃取率大小的因素 4

2结果与分析 4

2.1 单因素实验 4

2.1.1 乙醇质量分数对七叶一枝花总黄酮萃取效果的影响 4

2.1.2 硫酸铵质量分数对七叶一枝花总黄酮萃取效果的影响 5

2.1.3 pH对七叶一枝花总黄酮萃取效果的影响 6

2.1.4 NaCl质量分数对七叶一枝花片总黄酮分配行为的影响 7

2.2关键因素的选取 8

2.3 响应面法优化与分析 8

2.4响应面法优化萃取条件验证 11

3 结论与讨论 12

参考文献 12

致谢 14

七叶一枝花总黄酮分离提取工艺研究

引言

七叶一枝花又名七叶莲、车河草，百合科，重楼属植物；喜阴植物，常生长于林下避光处。其根茎可以作为中草药食用，有消肿止痛、清热解毒的功效，也可用于治疗肿毒或者毒蛇咬伤[1]。七叶一枝花主要成分是黄酮、甾体皂甙、蚤休士宁苷及生物碱等；其中以黄酮的医用价值较高，能将氧自由基有效的清除，阻止细胞的退化、衰老 [1]。黄酮中还含有PAF的抗凝因子，不仅利于血液循环、降低胆固醇，还能降低心脑血管疾病的发病率，使心血管疾病患者的症状得到缓解[ [1-2]。

传统提取总黄酮工艺中，采用水提法或者有机溶剂浸提等常规方法，不仅提取效果差，而且提取率也非常低。乙醇/盐体系作为新型的双水相体系，因材料价格低、溶剂粘度小、原料丰富、试剂易回收等优点，适合七叶一枝花总黄酮的分离萃取。本研究在单因素实验的基础上，利用双水相体系萃取七叶一枝花总黄酮，并借助响应面法拟合出一个多元二次回归方程，来达到预测最优条件参数的目的，为七叶一枝花中总黄酮最大程度上的利用和开发提供了依据[3]。