1.1.2培养基

LB固体培养基：蛋白胨1g，琼脂粉1.5g，酵母粉0.5g，氯化钠1g，蒸馏水100ml

LB液体培养基：蛋白胨1g，酵母粉0.5g，氯化钠1g，蒸馏水100ml

以上所有培养基灭菌条件：121 ℃，0.1 MPa，30 min。

1.1.3主要试剂

（1）电泳缓冲液（1×TAE）：首先配置1000ml 的50×TAE：242gTris碱，100mlEDTA(0.5mol/L)，冰醋酸57.1 ml 混匀于1000ml 的容量瓶中用蒸馏水定容至1000ml，再从中取出20 ml于1000ml 的容量瓶中用蒸馏水定容至1000ml。

(2)1%琼脂糖凝胶：称取1g琼脂糖于1000ml广口瓶中，再加入100ml1×TAE，微波炉加热2分钟，至无沉淀或絮状物出现为止，冷却至微微烫手即可倒入制胶槽中，然后等凝固完全后取出备用。

(3)Enzymatic Lysis Buffer：20mM Tris,PH 8.0,2 mM Na-EDTA,PH 8.0,1.2% Triton X-100 121℃灭菌处理20 min加入适量的Lysozyme(溶菌酶）其终浓度为20mg/ml。

（4）0.1M氯化钙与氯化镁混合液：称取1.11g氯化钙，2.03g氯化镁，再加蒸馏水定容至100ml容量瓶中，摇匀灭菌后备用。

（5）0.1M氯化钙：无水氯化钙1.11 g，用蒸馏水溶解，定容至100 mL容量瓶中，摇匀灭菌后备用。

（6）细菌基因组DNA提取试剂盒（Bacteriagen DNA Kit)，北京康为世纪生物科技有限公司

（7）通用型DNA纯化回收试剂盒(Universal DNA Purification Kit）北京康为世纪生物科技有限公司。

（8）Hipure Plasmid Mini Kit质粒提取试剂盒，深圳市汉普生物科技有限公司。

1.2仪器与设备

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