C 盐酸水解法

盐酸水解法是检测氨基酸的常规方法，即所谓的国家标准方法，在社会上具有广泛认可性。其基本原理是硫酸作用后植物纤维水解成游离氨基酸，定性检测采用茚三酮溶液，再用阴离子交换树脂分离，最后用紫外可见分光光度计测定其GABA含量，浓度检测的最小值为10pmol[13]，然而，这种方法应用不广泛，如果植物中蛋白质含量太低的话则很难检测出来。

D 膜渗透分离技术

膜渗透分离技术是利用由化学差异或外部能量驱动的选择性渗透膜，由于膜两侧的驱动力不同，为了分离和纯化的目的，液体中的物质被选择性地渗透。何顺等人在很早之前就建立了连续渗透分离和间歇渗透分离两种分离纯化方式，产率竟然高达95%[4]。分离GABA通常将抽滤和超声结合起来，实验表明这样可以获得高纯度的GABA，但该方法存在缺点,例如分离膜容易被杂质污染，容易发生浓差极化，导致阻塞。

2、含量测定方法

在室温下，GABA为白色结晶，形状如针，稍微带点臭味，不是很浓，在阴暗潮湿环境中易潮解，需要密封保存，如果存放在干燥环境中则很稳定，高温下易分解。GABA含量测定方法很多，但是，GABA不吸收紫外线，因此选择时不能通过紫外线吸收方法检测。目前，比色法，氨基酸分析仪，电泳，色谱法等是测定GABA含量的方法[5]。

（1）比色法

       比色法就是使用紫外-可见分光光度计法测定分析无的含量，即使用朗伯比尔定律，具体方法是用茚三酮反应，具体步骤是先加入适量的3％茚三酮溶液，控制反应条件为加热或弱碱环境，由于所有的氨基酸可与茚三酮反应，形成蓝色物质，这样就在紫外条件下就有了可见吸收，最后进行定量计算即可。但是结果会随反应条件的不同（如pH、温度、电荷等）而不同，所以要具体分析[14]。基于Berthelot的颜色反应，陈恩成等人通过再次蒸馏作为着色剂的甲苯和次氯酸盐溶液进行显色反应，并且在745nm下测量内容物[16]，此方法适用于大多数植物中GABA含量的测定，但同时也存在一些不足，如对操作过程的条件要求比较苛刻，即不能存在各种铁盐，防止对实验结果产生干扰[7]。

（2）放射性免疫法

1969年，洛耶和迪克曼等人发明并创造了放射免疫测定法，后来它被用于GABA含量检测实验，以结合免疫反应的特异性和放射性元素的敏感性的优点。使用同位素标记的抗原蛋白质与GABA结合，通过放射仪分析抗原位置进而求出GABA含量[15]。此方法具有针对性强、灵敏度高、操作快等优点，但是也存在不足之处，即受药盒时间       限制。

（3）纸上电泳法

所谓纸电泳法是采用纸为基体，通过添加外加磁场，受试化合物受到洛仑兹力，发生定向移动，由于物质的质量不同，运动的速度也会不同，从而达到分离的效果。汤素琴等人采用这种方法检测松树叶中GABA含量，分离效果较好且电泳斑点清晰，与放射性免疫法的测试结果相比较，两者之间差异不大[31]。此外，该方法具有可回收性，灵活度高，检测速度快，节约成本等优点，但同时还存在操作繁琐，功耗低，需要控制温度和pH值等缺点。

（4）酶联荧光法

酶联荧光（ELISA）也称为ELISA。因此，由待测分析物连接的分析物和抗体底物将产生可定量检测的显色反应。李民泽和王全德等人利用GABA酶偶合真菌蛋白酶建立了GABA定量检测方法。此方法具有针对性强，灵敏度高，线性范围大，精度低等特点[22]。

（5）氨基酸分析仪法

氨基酸分析仪是我国认可的测定氨基酸含量的重要方法之一，在生物界也得到了广泛认可。检测原理很简单：测试样品含有多种氨基酸，各种氨基酸的极性，结构，分子量各不相同。根据这些性质的不同，将它们使用正离子交换柱或负离子交换柱分离，然后通过柠檬酸盐洗脱。最后，将茚三酮投入反应液中，由于会发生显色反应，用紫外分光光度计测定其含量。曹玲等人用双波长紫外分析仪来测定，该分析仪器灵敏度高，最低检测限高达1pmol，重现性好，效率高，并且无需事先处理即可用于大规模测试[4]。