将96孔板置于培养箱中30℃培养，48h后观察结果并记录。

实验中应将实验所用菌悬液稀释后进行涂板计数，菌悬液的作用浓度应为5×105-5×106CFU/ml。培养后的阳性对照组有细菌生长呈浑浊状，阴性对照组无细菌增长呈透明，试验组中无细菌生长的最高稀释倍数为最小杀菌浓度。

1.2.3芬母多肽对养殖水体杀菌实验

养殖水体由元鑫水产养殖场提供，该养殖场对罗氏沼虾幼体的养殖水体为人工配制的海水，其盐度为4.5-5.5ppm，罗氏沼虾幼体20天前在人工海水中养殖，水体温度保持在33摄氏度，并且进行不间断供氧，保证水体中充足含氧量，每天排污两次，每隔48h换去养殖塘中一半人工海水。20天后将已经完成变态的虾苗转移至淡水养殖，未完成变态的幼体继续在人工海水中养殖。此次试验样品芬母多肽作用的水体分别为养殖0天，养殖7天和养殖15天的水体。

配制LB固体培养基：根据样品数量，算的需配置的培养基体积。LB固体培养基：在950 ml去离子水中加入10g蛋白胨、10g氯化钠、5g酵母粉、15g琼脂粉，摇动容器额直至溶质溶解，用去离子水定容至1L。培养基封口，标签、置于高压灭菌锅内121℃灭菌15分钟。灭菌后放入55℃温水浴中冷却。

分别配制浓度为0.000004g/ml、0.000012g/ml、0.000036g/ml、0.00004g/ml、0.00012g/ml、0.00036g/ml、0.0004g/ml、0.0012g/ml、0.0036g/ml、0.004g/ml、0.012g/ml、0.036g/ml的样品芬母多肽。

取第0天、7天、15天的养殖水体3ml加入EP管，然后分别加入300ul不同浓度的芬母多肽，对照组加入300ul无菌水，每组设置一组平行实验。

将混合液摇匀后依次稀释10倍、100倍，分别取500ul混合液体倾注平板，均匀摇晃平皿使液体分布均匀，在培养皿内倒入LB固体培养基，轻轻晃匀后晾干，将培养皿放入恒温培养箱中倒扣培养，37℃培养12h，培养完成后菌落计数，计算杀菌率。

1.2.4芬母多肽对罗氏沼虾幼体养殖的实际应用实验

取若干相同规格的塑料水桶，充分清洗后用消毒液浸泡消毒，清水冲洗浸泡4-5次至桶内及外壁无消毒液残留，并将桶晾干编号。

   设置一系类养殖密度的预实验，探寻小规模养殖的最佳的罗氏沼虾幼体密度，本次试验养殖密度为每个实验桶内有6L养殖水体和300只罗氏沼虾幼体，其中养殖水体为人工海水，盐度为4.5-5.5ppm，罗氏沼虾幼体经过20-26天发育为幼苗，该养殖场20天到24天的养殖水体温度为33℃。

   每桶随机选取300只第20天且未变态的罗氏沼虾幼体，并且每桶加入人工海水6L，将桶编号放入恒温水池中水浴，水池温度保持在33℃，将桶固定于水池中保证桶不会侧翻并且尽可能减少桶的摇晃，并在桶中放置充气砂石保证桶中水体具有充足的含氧量。

   配置不同浓度的芬母多肽加入到水桶中的小环境水体中，每组浓度设置两组平行对照并且设置空白对照组。分别于18h、24h、42h和48h计算死亡率以及变态率，记录并整理实验数据。